激光共聚焦显微镜的原理

激光共聚焦显微镜的原理

激光共聚焦显微镜脱离了传统光学显微镜的场光源和局部平面成像模式，激光扫描共聚焦显微镜光路图采用激光束作光源，激光束经照明针孔，经由分光镜反射至物镜，并聚焦于样品上，对标本焦平面上每一点进行扫描。

激光可以代替日光和灯光等。冷光源用激光可以加大分辨率。

如何利用荧光显微镜检测细胞凋亡

1、收集约106细胞，用冷PBS洗2次。

2、4%福尔马林4℃固定10min左右后涂片，晾干。

3、以5-10μg/mL hocchst 33258染色5-10min，水冲净，晾干后观察，以紫外光（340nm）激发hocchest。

4、细胞凋亡是指为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡。细胞凋亡与细胞坏死不同，细胞凋亡不是一件被动的过程，而是主动过程，它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用，它并不是病理条件下，自体损伤的一种现象，而是为更好地适应生存环境而主动争取的一种死亡过程。

5、细胞凋亡有别于细胞坏死，它有一系列的细胞形态学和生物化学的改变，包括出现染色体浓缩、DNA降解、凋亡小体的形成等。在正常的活细胞中，磷脂酰丝氨酸（phosphotidylserine,PS）位于细胞膜内侧，但在凋亡细胞中，PS从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中，Annexin-V（膜联蛋白-V）是一种分子量为35-36KD的Ca2+的依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力结合。因此将Annexin-V进行荧光素（如FITC 、PE）或生物素（biotin）标记，以标记了的膜联蛋白-V作为探针，利用荧光显微镜检测细胞凋亡的发生。

显微镜操作步骤

1、取用和放置使用时首先从镜箱中取出显微镜，必须一手握持镜臂，一手托住镜座，保持镜身直立，切不可用一只手倾斜提携，防止摔落目镜。要轻取轻放，放时使镜臂朝向自己，距桌边沿5-10厘米处。要求桌子平衡，桌面清洁，避免直射阳光。

2、开启光源打开电源开关。

3、放置玻片标本将待镜检的玻片标本放置在载物台上，使其中材料正对通光孔中央。再用弹簧压片夹在玻片的两端，防止玻片标本移动。若为玻片移动器，则将玻片标本卡入玻片移动器，然后调节玻片移动器，将材料移至正对通光孔中央的位置。

4、低倍物镜观察用显微镜观察标本时，应先用低倍物镜找到物像。因为低倍物镜观察范围大，较易找到物像，且易能找到需作精细观察的部位。

原子力显微镜的工作模式

原子力显微镜是一种可用来研究包括绝缘体在内的固体材料表面结构的分析仪器。它通过检测待测样品表面和一个微型力敏感元件之间的极微弱的原子间相互作用力来研究物质的表面结构及性质。将一对微弱力极端敏感的微悬臂一端固定，另一端的微小针尖接近样品，这时它将与其相互作用，作用力将使得微悬臂发生形变或运动状态发生变化。扫描样品时，利用传感器检测这些变化，就可获得作用力分布信息，从而以纳米级分辨率获得表面形貌结构信息及表面粗糙度信息。

原子力显微镜的工作模式是以针尖与样品之间的作用力的形式来分类的。主要有以下3种操作模式：接触模式、非接触模式和敲击模式。