如何利用荧光显微镜检测细胞凋亡

如何利用荧光显微镜检测细胞凋亡

1、收集约106细胞，用冷PBS洗2次。

2、4%福尔马林4℃固定10min左右后涂片，晾干。

3、以5-10μg/mL hocchst 33258染色5-10min，水冲净，晾干后观察，以紫外光（340nm）激发hocchest。

4、细胞凋亡是指为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡。细胞凋亡与细胞坏死不同，细胞凋亡不是一件被动的过程，而是主动过程，它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用，它并不是病理条件下，自体损伤的一种现象，而是为更好地适应生存环境而主动争取的一种死亡过程。

5、细胞凋亡有别于细胞坏死，它有一系列的细胞形态学和生物化学的改变，包括出现染色体浓缩、DNA降解、凋亡小体的形成等。在正常的活细胞中，磷脂酰丝氨酸（phosphotidylserine,PS）位于细胞膜内侧，但在凋亡细胞中，PS从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中，Annexin-V（膜联蛋白-V）是一种分子量为35-36KD的Ca2+的依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力结合。因此将Annexin-V进行荧光素（如FITC 、PE）或生物素（biotin）标记，以标记了的膜联蛋白-V作为探针，利用荧光显微镜检测细胞凋亡的发生。

使用显微镜的步骤

1、放在实验台上略偏左。

2、对光：转动转换器，使低倍物镜对准通光孔。

3、把较大的光圈对准通光孔。左眼注视目镜内，转动反光镜，使光线通过通光孔反射到镜筒内。

4、把玻片标本放在载物台上，正对通光孔中心。

5、调整对焦，直到看清物像为止。

显微镜的作用是什么

显微镜的作用是通过放大物体的具体形态来研究物体的构造和具体的内部特征，主要应用于物理生物和医学的方面，通过显微镜放大后，可以直观的了解细胞和各种细小物体的内部构造，来做出相应的研究，对疾病的治疗有一定的帮助。

显微镜的主要用途：

显微镜被用来放大微小物体的图像。一般应用于生物、医药、微观粒子等观测。

(1)利用微微动载物台之移动，配全目镜之十字座标线，作长度量测。

(2)利用旋转载物台与目镜下端之游标微分角度盘，配全合目镜之址字座标线，作角度量测，令待测角一端对准十字线与之重合，然再让另一端也重合。

(3)利用标准检测螺纹的节距、节径、外径、牙角及牙形等尺寸或外形。

(4)检验金相表面的晶粒状况。

(5)检验工件加工表面的情况。

(6)检测微小工件的尺寸或轮廓是否与标准片相符。