镁离子在PCR中的作用

镁离子在PCR中的作用

镁离子在PCR中的作用是与dNTP、核酸骨架相互作用，影响Polymerase的活性。

镁离子浓度对PCR扩增效率影响很大，浓度过高可降低PCR扩增的特异性，浓度过低则影响PCR扩增产量，甚至使PCR扩增失败而不出扩增条带；

一般镁离子的浓度在0.5毫摩尔每升到5毫摩尔每升之间，调整dNTP的浓度后要相应的调整镁离子的浓度。

影响PCR扩增结果的因素

1、引物：引物到用户手头前都是以干粉形式存在的，干粉很容易丢掉，引物溶解后可以测定一下OD，将所有引物的浓度调整到一致，对实验有一定帮助。

2、高温聚合酶：高温聚合酶是非常稳定的，除非有蛋白酶的污染。但是不同公司提供的酶扩增是有差异的，活性定量和标示未必相同。选用表现一贯稳定的酶，而不是最便宜的。

3、缓冲液：缓冲液一般不容易出问题，只是使用前需要彻底融化混匀使用。

4、温度：变性和退火温度是主要需要考虑的。

5、模板：PCR 的关键之一，模板不是越多越好。

6、dNTP: dNTP是PCR扩增体系中最不稳定的，反复冻融会使dNTP发生降解。

7、Mg2+:是TAQ活性所必须的，浓度过高过低对反应都有比较大的影响。过低，合成效率会下降，过高，非特异性会加大。

荧光定量pcr是检查什么

荧光定量pcr是检查支原体衣原体感染的一个检查，它主要是通过PCR原理来检测，是否有过多的支原体衣原体出现感染。

实时荧光定量PCR（QuantitativeReal-timePCR）是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应（PCR）循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。

Real-timePCR是在PCR扩增过程中，通过荧光信号，对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期，模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系，所以成为定量的依据。

PCR的高保真酶都有哪些啊

常见的高保真酶有Pfu，Pfu Ultra，但是我用过最好用的高保真酶是Phusion.因为一般的高保真酶因为有外切酶的活性，虽然提高了保真度，但是扩增效率会降低，所以用Pfu的时候，往往需要扩增时间要比Taq酶长，Pfu Ultra好一些。但是都难免会碰到Taq酶P有条带，换成高保真酶，直接P可能没有结果，或者是条带很弱。Phusion最牛，保真度可能大概有Taq酶的50来倍，而且太强劲了，基本没有P不出来过。