PCR与测序反应的异同点

PCR与测序反应的异同点

相同点：都是基于碱基互补配对原则，在DNA聚合酶作用下的聚合反应。

不同点：1、反应过成不同。PCR是引物对扩增，测序则是单引物扩增。2、反应成分不同。PCR是需要4种脱氧碱基，测序则有ddNTP。

PCR的高保真酶都有哪些啊

常见的高保真酶有Pfu，Pfu Ultra，但是我用过最好用的高保真酶是Phusion.因为一般的高保真酶因为有外切酶的活性，虽然提高了保真度，但是扩增效率会降低，所以用Pfu的时候，往往需要扩增时间要比Taq酶长，Pfu Ultra好一些。但是都难免会碰到Taq酶P有条带，换成高保真酶，直接P可能没有结果，或者是条带很弱。Phusion最牛，保真度可能大概有Taq酶的50来倍，而且太强劲了，基本没有P不出来过。

PCR基因扩增原理

将待扩增的模板DNA变性使之成为单链，DNA样品中，特异性的引物能够与其互补的序列杂交，在脱氧核苷三磷酸和Taq酶存在时，就可以合成模板 DNA的互补链，反应完成后，将反应混合物加热使DNA双链变性，温度下降后，过量的引物又可以开始第二轮的合成反应。这种延伸，变性，退火，延伸的循环可以重复多次，使所需要的DNA片段得到特异性的扩增。