如何利用荧光显微镜检测细胞凋亡

如何利用荧光显微镜检测细胞凋亡

1、收集约106细胞，用冷PBS洗2次。

2、4%福尔马林4℃固定10min左右后涂片，晾干。

3、以5-10μg/mL hocchst 33258染色5-10min，水冲净，晾干后观察，以紫外光（340nm）激发hocchest。

4、细胞凋亡是指为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡。细胞凋亡与细胞坏死不同，细胞凋亡不是一件被动的过程，而是主动过程，它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用，它并不是病理条件下，自体损伤的一种现象，而是为更好地适应生存环境而主动争取的一种死亡过程。

5、细胞凋亡有别于细胞坏死，它有一系列的细胞形态学和生物化学的改变，包括出现染色体浓缩、DNA降解、凋亡小体的形成等。在正常的活细胞中，磷脂酰丝氨酸（phosphotidylserine,PS）位于细胞膜内侧，但在凋亡细胞中，PS从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中，Annexin-V（膜联蛋白-V）是一种分子量为35-36KD的Ca2+的依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力结合。因此将Annexin-V进行荧光素（如FITC 、PE）或生物素（biotin）标记，以标记了的膜联蛋白-V作为探针，利用荧光显微镜检测细胞凋亡的发生。

简易显微镜的制作步骤急用

制作准备：1.平面废洗洁精瓶一个。2.平面镜一块，玻璃二块。3.60厘米长的铁丝一根。4.废旧小电珠一个。

1、制作镜头：把旧电珠的薄玻璃去掉，留下球状部分。把洗洁精瓶盖去掉，将小镜头置于瓶口。

2、制作镜筒：将洗洁精瓶身靠近底面三分之一处挖掉一面，将画有微小圆形的透明纸，对着亮光，通过镜头看圆形在什么位置看得最清楚，就在对应位置上的瓶身开两个槽口，这两个槽口是用来插进玻璃片。

3、制作反光镜：找一块30毫米平方的平面镜片，在后面用胶纸粘在铁丝上，在镜筒上钻两个小孔，将铁丝插入小孔里，这样一个简易的显微镜就制作好了。

如何简单制作生物显微镜切片

1、首先准备一片干净的载玻片；

2、然后在上面滴一滴蒸馏水，最佳的位置是在载玻片的右边三分之一出，方便贴标签；

3、将制作好的切片或者需要观察的培养液滴入蒸馏水中；

4、再拿着盖玻片使用约四十五度的角慢慢放下，让盖玻片盖住标本不要有气泡；

5、最后将被挤出来的多余的水用吸纸吸干，制作完成。

显微镜移动标本的方法

1、如果就是从视野中看到的标本在左边，那么因为标本要经过两次放大，根据顺口溜 上下颠倒，左右相反 可以判断标本实际是在右边，需要向左移动。同理，如果标本是在视野的左上方的话，需要向左上方移动。

2、总之从视野中看到标本在哪方，就向哪方移动。